1、細(xì)胞懸浮反復(fù)凍融3次,3000rpm離心15min,取上清液500ul。2、500ul樣品中加入3ul1.5MTris-Cl,20ul 0.5mol/mlEDTA和5.2u1 Np-40。3、加入終濃度為50ug閱讀全文
異硫氰酸胍法 取1 g葉片,液氮下充分研磨,迅速轉(zhuǎn)移至離心管,加入3 mL 異硫氰酸胍提取液(4M異硫氰酸胍、2.5 M檸檬酸鈉,pH7.0,0.5 %十二烷基肌氨酸鈉,0.1 M巰基乙醇) 混勻。再依次加入0.3 mL 2 M NaAc 閱讀全文
方法一:1.取兩片幼嫩新鮮葉片,置于預(yù)冷的研缽中,倒入適量液氮,迅速研磨成粉末狀,隨后加入3ml預(yù)熱的2%CTAB抽提緩沖液和50ul抗氧化劑2-巰基乙醇,繼續(xù)研磨成略有流動(dòng)性的糊狀或粥狀,轉(zhuǎn)入1.5ml的離心管中,于65℃水浴鍋中保溫約6閱讀全文
1. 組織塊解凍,取適量組織于PBS溶液中清洗干凈后放入裝有500微升PBS的離心管中(1.5ml),用剪刀剪碎;12000rpm離心8min,取出棄上清;2. 加入0.45ml TES混勻,再加入50ul SDS(10%),20ul蛋白酶閱讀全文
1、低熔點(diǎn)瓊脂糖挖塊法:在瓊脂糖主鏈導(dǎo)入羥乙基修飾后,其凝固點(diǎn)溫度降為30度,熔化溫度為65度,這一溫度低于絕大多數(shù)雙鏈DNA的變性溫度,利用這類凝膠純度高熔點(diǎn)低的特點(diǎn),在水平式瓊脂糖凝膠電泳上,使所需的目的DNA片段轉(zhuǎn)移到低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠閱讀全文
直接法提取DNA直接法提取DNA的步驟如下:1)取1g土樣,倒入滅菌的50mL離心管中2)加入10mLTENPP緩沖液(20&nbs閱讀全文
方法一:1.將冰凍的血在室溫下溶化;2.取1ml血液轉(zhuǎn)入一無菌的2ml離心管中,加入等體積的PBS磷酸鹽緩沖液,充分混勻后12000rpm離心5min,棄上清;3.加入667μl STE,24μl的20%的SDS,37℃水浴1h;4.加10閱讀全文
方法一:改良TES水浴法將蠟塊組織切片為10μm大小,修剪掉多余的石蠟,取10片置于1.5ml Eppendorf 管中,加入1ml TES溶液充分振蕩10min,70℃水浴30min,15000r/min 離心15min,棄上清,重復(fù)2次閱讀全文
方法一:石英砂法1、5000rpm×5min 收集過夜培養(yǎng)的菌體(5ml左右),于 200μL 裂解液(50 mmol/ L Tris-HCl pH 8.0 , 180 mmol/ LEDTA pH 8.0 , 1 % SDS , 現(xiàn)配)中閱讀全文
一、異硫氰酸胍提取法1、取200μl樣品數(shù)+陰性對照+陽性對照加入1.5ml滅菌Eppendorf管;2、加600μl異硫氰酸胍,然后加入對照和樣品,再加200μl氯仿,顛倒混勻;3、13000rpm離心15min;閱讀全文