1、低熔點(diǎn)瓊脂糖挖塊法：在瓊脂糖主鏈導(dǎo)入羥乙基修飾后，其凝固點(diǎn)溫度降為30度，熔化溫度為65度，這一溫度低于絕大多數(shù)雙鏈DNA的變性溫度，利用這類凝膠純度高熔點(diǎn)低的特點(diǎn)，在水平式瓊脂糖凝膠電泳上，使所需的目的DNA片段轉(zhuǎn)移到低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠內(nèi)，經(jīng)65度水浴5-10分鐘，使之溶化，用飽和酚抽提，就可以分離到所需DNA。

低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠中回收DNA

⑴、將已經(jīng)電泳確定的可回收的酶切產(chǎn)物在合適濃度的回收用瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳。最好換用新的電泳緩沖液10 × TAE（10 ×Tris-乙酸）。 

⑵、當(dāng)溴酚藍(lán)遷移至足夠距離時(shí)（至少2 cm以上），在長波紫外燈下觀察，用清洗過的刀片在目的片段前切下與目的片段同長，寬度適當(dāng)（一般2 cm左右）的膠塊。 

注意： ①不要忘記在膠下墊一個(gè)新的塑料手套防止污染。 ②小心不要將回收膠切裂，同時(shí)注意與目的帶相鄰的切面要盡量平整。

⑶、將切好的回收膠塊放在回收膠槽內(nèi)，在切去膠塊處加入低熔點(diǎn)瓊脂糖膠，待其凝固后將其小心放回電泳槽繼續(xù)進(jìn)行電泳。小心低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠塊與原回收膠塊的交界面易斷裂。 

⑷、待目的帶完全進(jìn)入低熔點(diǎn)瓊脂糖膠后，在長波紫外燈下用清洗過的刀片切下含有所需DNA帶的凝膠條，置于新的滅菌的1.5 mL Eppendorf管中，加300 μL TE。 

⑸、65℃水浴10 min或更長使膠塊完全融化。 

⑹、立即加入等體積（300~350 μL）Tris-Cl飽和酚（pH 8.0），搖晃混勻。 

⑺、12000 rpm離心5 min。 

⑻、小心將水相移到另一1.5 mL Eppendorf管中，加入2.5~3倍體積（780 μL即可）預(yù)冷無水乙醇。注意不要吸入下層雜質(zhì)及酚相，沒把握時(shí)寧可放棄一些上層水相。 

⑼、12000 rpm離心5 min。 

⑽、小心將水相移到另一1.5 mL Eppendorf管中，加入2.5~3倍體積（780 μL即可）預(yù)冷無水乙醇。注意不要吸入下層雜質(zhì)及酚相，沒把握時(shí)寧可放棄一些上層水相 

⑾、置液氮3 min，取出后可置于－20℃放幾min。小心防止管子爆裂。 

⑿、12000 rpm離心10 min。 

⒀、迅速棄上清，一般在管底會(huì)有針尖大小的沉淀物，小心用無水乙醇清洗后置于恒溫器上干燥（55℃）5~10 min至無乙醇?xì)馕叮偌尤?/span>20 μL ddH2O溶解。 14、取20 μL電泳定量后－20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/span>

2、玻璃棉離心法：利用玻璃棉為支持介質(zhì)，通過離心，使含有目的基因DNA片段的溶液從凝膠中析出，經(jīng)離心管底部的小孔流入套管，再用酚純化、乙醇沉淀，獲得所需的目的基因片段。

3、透析袋電泳法：與常規(guī)瓊脂糖電泳原理相同，將含有目的基因片段的凝膠切下來，裝入透析袋中，同時(shí)裝入電泳緩沖液，再按常規(guī)電泳方法電泳，讓DNA在透析袋內(nèi)走出凝膠塊，再純化緩沖液中的DNA片段。

4、DEAE纖維素紙片回收法：將這種紙片插入到瓊脂糖凝膠，其位置正好在回收的DNA條帶的前方，使DNA向紙片方向泳動(dòng)并吸附在紙片上，然后把紙片取出再用洗脫液洗脫吸附的DNA

DEAE纖維素膜法凝膠回收DNA方法： 

（1）、消化一定量DNA以收獲至少100ng目的片段DNA。用含有0。5ug/ml EB的適當(dāng)濃，度的瓊脂糖凝膠電泳分離DNA片段。用手提式長波紫外燈對(duì)目的條帶進(jìn)行定位。  

    EB-DNA復(fù)合物的激發(fā)會(huì)導(dǎo)致染料的光猝滅以及單鏈DNA的破壞。用302nm擅長光源取代254nm光源將會(huì)降低這兩種危害。  

（2）、用鋒利的刀片或剃刀在緊靠目的條帶前的凝膠上切一切口，其兩邊比條帶寬約2mm。  如果需從整個(gè)瓊脂糖泳道上洗脫DNA(如哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因組DNA的限制酶消化物)，在凝膠上與目的泳道平行的位置做一切口，在切口處插入一長條 DEAE 纖維素膜(同步驟3) ．調(diào)整凝膠的方向使DNA可以從凝膠中電泳轉(zhuǎn)移至膜上。電泳結(jié)束后，取出膜，切成小片。從適當(dāng)?shù)哪ざ紊舷疵撍璐笮〉?/span>DNA(步驟7-11)  

（3）、戴上手套，切一塊與切口等寬而比凝膠稍深(1mm)的DEAE-纖維素膜。在10mmol/LEDTA(pH8。0) 室溫浸泡5min后，用0。5mol/L NaOH取代EDTA浸泡以活化DEAE-纖維素膜。再次室溫5min后，用無菌水沖洗6次 

（4）、用平頭懾子將切口壁撐開，將膜插入裂縫中。取出鑷子，使切口閉合，小心勿留氣泡。  降低非目的DNA污染的概率，可以采取以下措施之一： 

將含有目的條帶的凝膠切下，轉(zhuǎn)移到凝膠另一個(gè)區(qū)域切成適當(dāng)大小的小洞中。DNA條帶。  在目的條帶的后面插入第二張膜來截留不需要的DNA。 

（5）、繼續(xù)電泳(5V/cm)直至DNA條帶遷移到膜上。電泳過程中，可以用手提式長波紫外燈(302nm)進(jìn)行跟蹤檢測。  

繼續(xù)電泳的時(shí)間盡可能短，只要DNA從凝腔中轉(zhuǎn)移到膜上即可。過長時(shí)間的電泳會(huì)導(dǎo)致其他 DNA 的交叉污染(見上文)和瓊脂糖中污染物不必要的累積。 

（6）、當(dāng)所有目的DNA離開凝膠被收集到膜上時(shí)，切斷電流。用平頭鑷子從凝膠中取出膜，室溫下，用5-10ml DEAE低鹽緩沖液將膜漂洗一下，以除去膜上的瓊脂糖。  不要讓膜完全干燥，否則導(dǎo)致DNA發(fā)生不可逆的結(jié)合。  

（7）、將膜轉(zhuǎn)移到另一個(gè)微量離心管中，加足量的DEAE高鹽洗脫緩沖液使膜完全被浸沒。輕輕的將膜弄皺或?qū)φ郏灰獕壕o。蓋上離心管蓋，于65℃溫育30min。不時(shí)地檢查，不要讓膜伸展到緩沖面上。  

（8）、從膜上洗脫DNA的過程中，如方案2描述的那樣對(duì)凝膠成像，記錄被分離出的條帶。  

（9）、步驟7的液體轉(zhuǎn)移到另一微量離心管，再加入足量的DEAE高鹽洗脫緩沖液65℃溫育15min。合并兩份DEAE高鹽溶液。 

在紫外燈下檢查，確證膜上不再有可見的被EB染色的DNA痕跡。然后棄去用過的膜。 

（10）、高鹽洗脫液用酚：氯仿抽提一次。水相轉(zhuǎn)移到另一離心管。加入0.2倍體積的10mol/L乙酸銨，2倍體積的4℃乙醇。室溫放置10min。用微量離心機(jī)室溫以最大轉(zhuǎn)速離心10min。用70%乙醇小心洗沉淀。打開離心管幾分鐘，使乙醇完全揮發(fā)。再將DNA重溶到3-5ulTE(pH8.0)。  在沉淀以前加入10ug轉(zhuǎn)移RNA。可以改善少量DNA回收的效果．但是在加入載體 RNA 之前必須確定RNA不會(huì)影響DNA以后作為底物或模板的酶促反應(yīng)。  

（11）、如果需要極純的DNA(如用于小鼠受精卵的顯微注射或培養(yǎng)細(xì)胞電穿孔照下述方法用乙醇再沉淀DNA。  

a．用200 ulTE(pH8.0)懸浮DNA，加入25ul 3mol/L體積的乙醇重新沉淀DNA。      

b．4 ℃微量離心機(jī)最大速度離心 5-15min，回收DNA。  

 c．70 %乙醇小心漂洗沉淀。打開離心管幾分鐘，使乙醇完全揮發(fā)。將DNA溶于3-5 ulTE(pH8.0)。  

（12）、通過凝膠電泳對(duì)DNA進(jìn)行定性和定量。將少量 (10-50ng) 最終制備的DNA片段與10ul TE(pH8.0)混合，加入2ul所需的凝膠載樣緩沖液。  

加樣并在適當(dāng)濃度的瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳，以已知量的經(jīng)用適當(dāng)限制酶消化的原 DNA 作為參照物標(biāo)準(zhǔn)和分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。分離的片段應(yīng)該與限制酶消化產(chǎn)物中的相應(yīng)片段同步遷移。仔細(xì)檢查凝膠，看是否有弱熒光帶存在。弱熒光帶存在表明有DNA污染