1、細胞懸浮反復凍融3次，3000rpm離心15min，取上清液500ul。

2、 500ul樣品中加入3ul1.5MTris-Cl，20ul  0.5mol/mlEDTA和5.2u1 Np-40。

3、加入終濃度為50ug/ml蛋白酶k  13.125ul（存儲濃度為20mg/ml）55℃作用2h。

4、等體積的酚氯仿抽提；等體積的氯仿2次，12000rpm 5min。

5、將上清移入新的EP管中，加1/10體積的NaAC和2體積的無水乙醇，-70℃作用30min后，12000rpm10min.

6、70%無水乙醇洗滌兩次，曬干后用30ulTE溶解，-20℃保存備用。

7、再加終濃度為50ng/mLRnase,37℃作用1h。