1. 樣本精子挺多的,加無(wú)水乙醇后有些沉淀始終震不開,把沉淀一起吸到柱子上也不會(huì)堵柱子,但最后DNA濃度就很低,是什么原因
2. 試過上面的操作后,DNA溶度還是很低(不到10ng/μl),同一批抽提的濃度又可以達(dá)到50ng/μl
3. 精液DNA試劑盒抽出來(lái)的DNA可以做全外顯子測(cè)序么?
1.可能是DNA溶解不掉,可以將TE適度加熱,增加Buffer TE洗脫量(可增至200μl),延長(zhǎng)靜置時(shí)間,再次洗脫看看。
2.可以將沉淀用槍頭吹打,如果出現(xiàn)堵槍頭的情況,最簡(jiǎn)單的方法就是重做,精液的用量減到1/2到1/4,用生理鹽水補(bǔ)充到200 ul再操作(比如50 ul精液+150 ul生理鹽水)。
3.如果測(cè)序?qū)?/span>DNA沒有特殊要求,先進(jìn)行PCR后測(cè)序的話就可以。
注:不要把沉淀加到柱子上,沉淀中的DNA片段太長(zhǎng),很難洗脫下來(lái)——旋渦振蕩混勻有一個(gè)非常重要的目的是打斷基因組DNA。加乙醇后混勻肯定是越粗暴操作,DNA濃度越高。(可閱讀simgen公眾號(hào)文章“提取DNA應(yīng)該粗暴還是溫柔”,里面有詳細(xì)說(shuō)明)