答：

1） 細(xì)菌沉積在管底，難以用旋渦振蕩充分懸浮。如果要收集超過5ml細(xì)菌培養(yǎng)物，卻仍然使用快速收集菌體（12000 rpm 離心30秒）的方法，可能會(huì)導(dǎo)致收集的菌體難以懸浮，此時(shí)可嘗試用移液器吸頭吹打菌體沉淀的方法懸浮細(xì)菌；或者改為3000 rpm離心5分鐘收集菌體。

2） 加入Buffer II后，溶液變得非常粘稠，無法流動(dòng)。通常造成上述原因是細(xì)菌用量過多所至，請(qǐng)適當(dāng)減少細(xì)菌用量。

3） 加入Buffer II后，溶液未呈現(xiàn)粘稠的半透明狀，而是維持細(xì)菌在Buffer I中的渾濁狀，無粘滯感。上述現(xiàn)象通常是因?yàn)榧?xì)菌培養(yǎng)物中污染有大量的真菌，或者革蘭氏陽性細(xì)菌等不能被Buffer II 所溶解的微生物所致。應(yīng)確保從新鮮制備的含抗生素的平板中挑取單克隆菌落接種培養(yǎng)，而非用甘油菌接種。

4） 離心后沉淀不能沉積到管底，呈膨脹物的形式懸浮在液體中。通常是由于加入Buffer N8(III)后未充分中和所致，請(qǐng)翻轉(zhuǎn)離心管10次后再次離心。

5） 質(zhì)粒DNA上樣電泳時(shí)，加入上樣孔的DNA溶液不能下沉，上浮飄散開來。通常是因?yàn)楦咚倏针x步驟沒有操作，洗脫的質(zhì)粒中乙醇含量過多所致。