Trizol試劑是基于異硫氰酸胍/酚法的一種即用型的從不同類型的樣本中提取總RNA的試劑，Trizol純化RNA既不限制樣本種類也不限制起始樣本量，是實驗室最常用的RNA純化方法。但是用Trizol試劑純化RNA的不足之處在于需要很長的離心和RNA干燥時間，并且純度通常還比過柱純化獲得的RNA來的更差。

所以在RNA純化柱隨處可得的情況下，自制Trizol柱純化試劑盒不失為提升工作效率和工作質量的好方法。我們來看一下怎么在實驗室自己進行Trizol柱純化吧。

自備試劑：

(1) Trizol試劑

(2) RNA純化柱（購自Simgen RNA純化柱，Cat. No. 7301050）

(3) 70%乙醇

(4) DEPC處理水

實驗儀器與耗材：

(1) RNase-free 1.5 ml離心管和移液器及吸頭

(2) 臺式小量離心機（可配離心1.5 ml離心管和2 ml離心管的轉子）

(3) 液氮與研缽

操作方法：

(1) Trizol 方法操作至離心分相，進入以下操作步驟。

(2) 吸取上層水相轉移到一個潔凈的1.5 ml 離心管中，加入等體積的70%乙醇，勿棄吸頭，直接用吸頭吸注兩次混勻，吸取600 μl混合液轉移到核酸純化柱（核酸純化柱置于2 ml 離心管中）中，蓋上管蓋，12000 rpm 離心30秒。

(3) 棄2 ml 離心管中的濾液，將核酸純化柱置回到2 ml 離心管中，將1.5 ml 離心管中剩余的液體全部加入核酸純化柱中，蓋上管蓋，12000 rpm 離心30秒。

(4) 棄2 ml 離心管中的濾液，將核酸純化柱置回到2 ml 離心管中，在核酸純化柱中加入700 μl 70%乙醇，12000 rpm 離心30秒（最好重復洗滌一次）。

(5) 棄2 ml 離心管中的濾液，將核酸純化柱置回到2 ml 離心管中，14000 rpm 離心1分鐘。

(6) 棄2 ml 離心管，將核酸純化柱置于一個RNase-free的1.5 ml離心管中，在純化柱中加入50 -100 μl DEPC處理水，蓋上管蓋，室溫靜置1分鐘，12000 rpm 離心30秒。

(7) 棄純化柱，洗脫的RNA可立即用于各種分子生物學實驗；或者將RNA儲存于-70℃備用。

使用效果：

用DIY的Trizol柱純化試劑盒提取的大腸桿菌RNA的電泳圖

第一條泳道是DL 2000 Ladder Marker，5 μl；

第二、三泳道是Trizol柱純化方法純化的細菌RNA，8 μl。

用分光光度計測得的RNA數據：

新景生物實驗室