在一個陽光明媚的早晨,小新正在忙碌的趕著寫實驗報告,抬頭發現實驗室的師兄師妹們正在貢獻自已的唾液,貌似打算做一次唾液基因組DNA提取實驗??吹酱司?,小新心想:要不我也貢獻點,順便測測自已唾液里的DNA有多少濃度?所以馬上開始行動~拿著自已的唾液帶著好奇心的我走進實驗室,恰好看見師兄正拿著我們的全血DNA小量試劑盒準備做實驗。小新心里充滿疑問,問:“咋們這個試劑盒也能提唾液里的基因組DNA?”“那當然了,全血、唾液、細胞懸浮液都可以”師兄笑著說。“好,那我來做吧”因為想看看是不是真的有這個效果,小新決定接手了這個實驗~
據小新所知,市場上從新鮮唾液里提取基因組DNA的試劑盒基本上都需要蛋白酶K的消化,而且實驗過程需要1個半小時左右。而我現在利用的全血DNA小量試劑盒則無需蛋白酶K消化,15分鐘就可以完成實驗。這無論在試劑上還是時間上都有著明顯的差距,就這樣,帶著好奇心的小新開始做實驗啦~
實驗材料及設備
樣本:300μl新鮮唾液
全血DNA小量試劑盒(simgen Cat. No. 3001050)、無水乙醇、
設備:臺式小量離心機(可配離心1.5ml離心管和2ml離心管的轉子)、水浴鍋和旋渦振蕩器
其他耗材:1.5ml離心管、移液器吸頭(為避免樣品間的污染,建議選用含有濾芯的移液器吸頭)、一次性手套及防護用品和紙巾
差不多15分鐘后,按耐不住好奇心的小新急匆匆的拿著8支剛提好的DNA在超微量分光光度計(simgen)上測量了DNA含量和純度。我們來看看~
從圖上看到,試劑盒從8個樣提取的DNA的D260/D280值都在1.8左右,此外,小新最后buffer TE洗脫體積為80μl,從不同人的樣本中所得到的DNA為2-5μg,可能這時你們會覺得為什么提到的DNA濃度會不一樣?嘻嘻~因為不同的人的口腔中的脫落細胞量不同,我們所提到的DNA濃度就不一樣了~由此看來用全血DNA小量試劑盒(simgen)提取唾液DNA還是能提到核酸的,但是這些核酸是不是我們所需要的基因組DNA還需驗證,所以隨后小新又以唾液DNA為模板進行了普通PCR。
β-球蛋白引物:(F:TTAGGCCTTAGCGGGCTTAGAC
R:CCAGGATTTTTGATGGGACACG,(產物長度1300bp)
模板:人類基因組DNA(陽性樣本)、隨機取兩管唾液DNA(檢測樣本1、檢測樣本2)。
反應條件:
PCR電泳圖:
從上圖可以看出,檢測樣本1和檢測樣本2擴出的條帶和陽性對照是在同一位置,對照DNA Marker可看出條帶正好在1200bp偏上的位置,是我們所需的PCR產物的長度1300bp左右,說明小新提取的唾液DNA是人類基因組DNA。
看到最終的實驗結果,小新之前心里的質疑自然而然的就消失了,原來15分鐘真的能從新鮮唾液里提取到基因組DNA(內心有點小澎湃)。好啦~今天就寫到這(讓我去激動會兒)~對了,如果有什么疑問的話,歡迎咨詢小新哦~technical@simgen.cn ,拜~
杭州新景生物