小新在做實驗的時候突然被BOSS叫了出來(不用說,肯定又是倒苦水),說是銷售部門又接到投訴了,某位顧客投訴我們的植物DNA試劑盒提取效率低。這次小新沒有拿著盒子就直接去做實驗,畢竟我都不知道問題出在哪里,總要去問一下吧。不問還好,一問簡直差點被氣得吐血!??!作為一個有尊嚴的試劑盒,它都是有說明書的?。?!說明書上寫的內(nèi)容明明是:用300-500mg 組織研磨,稱取50-100 mg研稱粉末狀的組織提取DNA,而這位客戶在沒有仔細閱讀說明書的情況下,給出了這樣的答復(fù): “你不是說用300-500 mg組織提取DNA嗎,我大概取了1/3離心管的植物組織樣提取的DNA,結(jié)果效率非常低好不好?。?!”一句話氣得小新當(dāng)場想把說明書撕了!但是本著顧客就是上帝的原則,我還是決定模擬客戶的實驗,做一下對照,等我拿到數(shù)據(jù)之后再跟你叫板!
小新去樓管阿姨種的蔬菜上扯了兩片辣椒葉,稱了1g葉片。將1g的植物組織用液氮研磨成粉末狀,分成兩管,編號為1的100mg,編號為2的500mg。按照植物組織DNA提取說明書進行操作,最終用100μl Buffer TE洗脫。測量OD值,并取8μl進行電泳檢測。不一會兒實驗結(jié)果就出來了。(小新的猜測是編號為2的那管根本提取不到DNA,畢竟整個體系被破壞的太厲害,一般的盒子提取DNA的效率會非常低,有些甚至一點都提不到┑( ̄Д  ̄)┍)
兩個樣本最終測得的OD值
以及電泳圖如下:
出乎意料,當(dāng)樣本量增加到500mg時,simgen的植物試劑盒也還是可以提取到DNA的,不過很遺憾,與100mg 的樣本比較,DNA濃度不是增加了5倍,而是濃度更低了。為什么呢?DNA結(jié)合到純化柱上需要一定的緩沖體系,當(dāng)加入過多的樣本時,會破壞原有的緩沖體系,導(dǎo)致純化柱結(jié)合DNA的效率降低。因此我們建議用戶,還是應(yīng)當(dāng)在說明書指導(dǎo)的范圍內(nèi)選擇組織用量,如果超過說明書指導(dǎo)的使用范圍,結(jié)果自然會不理想(不要瞎瘠薄做實驗,我們還是可以作朋友是的)
當(dāng)然啦,想要得到較多的DNA,可以將植物組織樣本在液氮條件下研磨研磨得更充分(當(dāng)組織研磨至面粉狀時,大部分植物細胞的細胞壁都已經(jīng)被打破),或者加入Buffer TE 后延長靜置時間(比如延長至10-20分鐘,DNA會更充分地溶解),可以更有效地提高DNA的獲取量。
好啦小新不廢話繼續(xù)去做實驗啦,我們下期再會么么噠(づ ̄ 3 ̄)づ
新景生物實驗室