夏日炎炎,酷熱的天氣使人心情煩躁,這個時候再來個操作繁瑣復雜的實驗豈不是火上澆油。每到這種熱得都不想動一下的時候,肯定有同學會想要是能“唰的一下”DNA就提好了那該多好啊。今天小新就為大家帶來一款快速血液DNA提取試劑盒,與市場上常見的半小時操作時間起步的試劑盒不同,它的血液DNA提取時間縮短到了8分鐘,打破了原來一直由新景生物保留的15分鐘內提取血液DNA(全血DNA小量試劑盒,Cat. No. 3003050)的記錄。更令人驚嘆的是:在8分鐘內提取的還是600 μl血液中的DNA!!!要知道像QIAGEN、天根等公司的血液DNA提取試劑盒,半小時提取的僅僅是200 μl血液中的DNA……接下來就讓我們看下這個產品具體是怎么做到的,以及提取效果如何。
一、實驗材料
人全血(EDTA抗凝)、快速全血DNA小量試劑盒(Simgen Cat.No.3003050)、2×PCR Mix(Simgen Cat.No.7003100)、1.3 kb β-球蛋白引物(F:TTAGGCCTTAGCGGGCTTAGAC/R:CCAGGATTTTTGATGGGACACG)
旋渦振蕩器(越新儀器,XH-C)
臺式離心機(eppendorf centrifuge 5415 D)
超微量分光光度計(Simgen Cat.No.sim100)
電泳儀(北京六一儀器廠,DYY-6C型)
PCR儀(Techne FPROG5Y Progene Thermal)
二、實驗步驟
(一)DNA提取
1. 在1.5 ml離心管中加入600 μl Buffer L7,再加入600 μl的全血(EDTA 抗凝),立即用力混合3~5次,使血樣生成褐色沉淀物,再旋渦振蕩30秒混合均勻,使沉淀物徹底分散開來。
2. 13200 rpm離心1分鐘。
3. 將步驟2中的上清液全部倒入到核酸純化柱(核酸純化柱置于2 ml離心管中)中,蓋上管蓋,12000 rpm離心30秒。
4. 棄2 ml離心管中的濾液,將核酸純化柱置回到2 ml離心管中,在核酸純化柱中加入800 μl Buffer WB,蓋上管蓋,12000 rpm離心30秒。
5. 棄2 ml離心管中的濾液,將核酸純化柱置回到2 ml離心管中,13200 rpm離心1分鐘。
6. 棄2 ml離心管,將核酸純化柱置于一個潔凈的1.5 ml離心管中,在純化柱中加入100 μl Buffer TE,蓋上管蓋,室溫靜置1分鐘,12000 rpm離心30秒得到全血DNA。
(二)PCR擴增
PCR擴增體系:
擴增程序:
94℃,5 min,{94℃,45 sec;55℃,45 sec;72℃,1 min 30 sec}×30 cycles,72℃,10 min。
三、實驗結果
1. 在超微量分光光度計上用Buffer TE調零,測量提取的DNA,結果如下:
2. 在1%的瓊脂糖凝膠上加入5 μl提取的DNA/擴增產物進行電泳,結果如下:
四、分析與討論
1. 從操作步驟可以計算出實際標明的時間總共是5分鐘,加上步驟銜接過程需要損耗的3分鐘,8分鐘完成血液DNA提取貨真價實,確實沒有夸張成分。好奇心強的小伙伴還可以掃描二維碼觀看真實的操作視頻:
2. 從濃度測量結果和圖1電泳結果可知,用快速全血DNA小量試劑盒提取到的全血DNA純度好,濃度高,條帶清晰完整,無降解現象。
3. 由圖2可知,在40 μl擴增體系中用18 μl提取的DNA(過量模板測試)作為模板進行擴增,擴增結果與陽性對照一致,并無觀察到明顯的抑制效果,進一步說明用快速全血DNA小量試劑盒提取到的全血DNA純度好,抑制物少,完全能滿足后續實驗需求。
所以,趕緊向我司及Simgen的經銷商們申請免費的試用裝,體驗快速(8分鐘)、大量(多至600 μl)提取到高純度全血DNA的美好過程吧----Simgen快速全血DNA小量試劑盒,讓實驗變得更簡單、更快捷。
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