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重大技術突破,8分鐘的柱純化血液DNA提取來襲

作者:新景實驗室
版權說明:本文系原創文章 轉載請標注出處和本文鏈接

夏日炎炎酷熱的天氣使人心情煩躁,這個時候再來個操作繁瑣復雜的實驗豈不是火上澆油。每到這種熱得都不想動一下的時候,肯定有同學會想要是能“唰的一下”DNA就提好了那該多好啊。今天小新就為大家帶來一款快速血液DNA提取試劑盒,與市場上常見的半小時操作時間起步的試劑盒不同,它的血液DNA提取時間縮短到了8分鐘,打破了原來一直由新景生物保留的15分鐘內提取血液DNA(全血DNA小量試劑盒,Cat. No. 3003050)的記錄。更令人驚嘆的是:在8分鐘內提取的還是600 μl血液中的DNA!!!要知道像QIAGEN、天根等公司的血液DNA提取試劑盒,半小時提取的僅僅是200 μl血液中的DNA……接下來就讓我們看下這個產品具體是怎么做到的,以及提取效果如何。

 

一、實驗材料

人全血(EDTA抗凝)快速全血DNA小量試劑盒(Simgen Cat.No.30030502×PCR MixSimgen Cat.No.70031001.3 kb β-球蛋白引物(FTTAGGCCTTAGCGGGCTTAGAC/RCCAGGATTTTTGATGGGACACG

旋渦振蕩器(越新儀器,XH-C

臺式離心機(eppendorf centrifuge 5415 D

超微量分光光度計(Simgen Cat.No.sim100

電泳儀(北京六一儀器廠,DYY-6C型)

PCR儀(Techne FPROG5Y Progene Thermal

 

二、實驗步驟

(一)DNA提取

1. 1.5 ml離心管中加入600 μl Buffer L7,再加入600 μl的全血(EDTA 抗凝),立即用力混合3~5次,使血樣生成褐色沉淀物,再旋渦振蕩30秒混合均勻,使沉淀物徹底分散開來。

2. 13200 rpm離心1分鐘。

3. 將步驟2中的上清液全部倒入到核酸純化柱(核酸純化柱置于2 ml離心管中)中,蓋上管蓋,12000 rpm離心30秒。

4. 2 ml離心管中的濾液,將核酸純化柱置回到2 ml離心管中,在核酸純化柱中加入800 μl Buffer WB蓋上管蓋,12000 rpm離心30秒。

5. 2 ml離心管中的濾液,將核酸純化柱置回到2 ml離心管中,13200 rpm離心1分鐘。

6. 2 ml離心管,將核酸純化柱置于一個潔凈的1.5 ml離心管中,在純化柱中加入100 μl Buffer TE,蓋上管蓋,室溫靜置1分鐘,12000 rpm離心30秒得到全血DNA

(二)PCR擴增

PCR擴增體系:

simgen-快速全血DNA小量試劑盒-2×PCR Mix -Sim-100超微量分光光度計- PCR擴增體系

擴增程序

94℃,5 min{94℃,45 sec55℃,45 sec72℃,1 min 30 sec}×30 cycles72℃,10 min

 

三、實驗結果

1. 在超微量分光光度計上用Buffer TE調零,測量提取的DNA,結果如下:

simgen-快速全血DNA小量試劑盒-2×PCR Mix -Sim-100超微量分光光度計- 測量提取的DNA結果

 

2. 1%的瓊脂糖凝膠上加入5 μl提取DNA/擴增產物進行電泳,結果如下:

simgen-快速全血DNA小量試劑盒-2×PCR Mix -Sim-100超微量分光光度計- 電泳圖

                   

四、分析與討論

1. 從操作步驟可以計算出實際標明的時間總共是5分鐘,加上步驟銜接過程需要損耗的3分鐘,8分鐘完成血液DNA提取貨真價實,確實沒有夸張成分。好奇心強的小伙伴還可以掃描二維碼觀看真實的操作視頻:

simgen-快速全血DNA小量試劑盒-2×PCR Mix -Sim-100超微量分光光度計- 實驗操作步驟二維碼

2. 從濃度測量結果1電泳結果可知,快速全血DNA小量試劑盒提到的全血DNA純度好,濃度高,條帶清晰完整,無降解現象。

3. 由圖2可知,40 μl擴增體系中用18 μl提取的DNA(過量模板測試)作為模板進行擴增,擴增結果與陽性對照一致,并無觀察到明顯的抑制效果,進一步說明用快速全血DNA小量試劑盒提到的全血DNA純度好,抑制物少,完全能滿足后續實驗需求

 

所以趕緊向我司及Simgen的經銷商們申請免費的試用裝,體驗快速8分鐘)大量(多至600 μl)提取到高純度全血DNA的美好過程吧----Simgen快速全血DNA小量試劑盒,讓實驗變得更簡單、更快捷

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