前段時(shí)間,小新在做植物DNA提取實(shí)驗(yàn)時(shí)失敗了,重復(fù)實(shí)驗(yàn)后還是沒有提取到DNA。當(dāng)時(shí)使用的樣本是羅漢松的葉片,小新查了相關(guān)資料了解到羅漢松屬于裸子植物亞門松杉綱,這類植物都是復(fù)雜抗逆植物,核酸較難提取。于是小新就想到了植物/真菌DNA試劑盒,這款試劑盒在之前的文章中也出現(xiàn)過,當(dāng)時(shí)提取的是真菌樣本。其實(shí)它不僅能提取復(fù)雜的真菌樣本,同樣也能提取復(fù)雜的植物樣本。
為了驗(yàn)證植物/真菌DNA試劑盒確實(shí)能提取這類樣本的DNA,小新又選了3種松杉綱植物(濕地松、雪松、水杉)進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn),下面就讓我們看看結(jié)果如何。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
對(duì)比Simgen的兩種植物DNA提取試劑盒對(duì)松杉綱植物DNA提取效果的差異。
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 濕地松、雪松、水杉、一次性手術(shù)刀、研缽
2. 植物DNA試劑盒(Simgen Cat.No.3201050)、植物/真菌DNA試劑盒(Simgen Cat.No.3200050)
3. 超微量電子天平(DENVER INSTRUMENT,TP-213)
4. 電子恒溫不銹鋼水浴鍋(上海宜昌儀器紗篩廠)
5. 旋渦振蕩器(越新儀器,XH-C)
6. 臺(tái)式離心機(jī)(eppendorf Centrifuge 5415 D)
7. 超微量分光光度計(jì)(Simgen Cat.No.sim100)
8. 電泳儀(北京六一儀器廠,DYY-6C型)
實(shí)驗(yàn)方法:
操作步驟如下:
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
1、在超微量分光光度計(jì)上分別用各自試劑盒的Buffer TE調(diào)零,測量洗脫下來的DNA,結(jié)果如下:
2、在1%的瓊脂糖凝膠上,加入5 μl洗脫的DNA進(jìn)行電泳,結(jié)果如下:
討論與分析:
1. 從濃度測量結(jié)果來看,可以明顯看到兩個(gè)試劑盒提取效果的差異。植物DNA試劑盒提取的DNA測得的濃度都極低,植物/真菌DNA試劑盒提取的DNA測得的濃度則遠(yuǎn)高于植物DNA試劑盒提取的DNA。結(jié)合圖一、圖二的電泳結(jié)果可以進(jìn)一步證明植物DNA試劑盒幾乎沒有提取到肉眼可見的DNA條帶,而植物/真菌DNA試劑盒則成功提取到了DNA。
2. 從圖一、圖二的電泳圖中可以看到植物/真菌DNA試劑盒提取的DNA中有明顯的RNA殘留,這也與測得的A260/A280比值相符合。一般新鮮樣本提取的DNA殘留有RNA是正常情況,并不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。若是想要徹底去除RNA ,可在水浴環(huán)節(jié)加入5 μl RNase A儲(chǔ)存液(50 mg/ml,Simgen Cat. No. 8001001)即可。
3. 從松杉綱植物葉片提取到的DNA濃度都不高,可能是該類植物葉片中含有的纖維素比較高所導(dǎo)致。還好植物/真菌DNA試劑盒一次可以提取500 mg植物樣本中的DNA,后續(xù)可以用提高樣本用量的方法來彌補(bǔ)。
4. 對(duì)于水杉、濕地松、雪松3種植物來說,使用植物DNA試劑盒提取的效果都不明顯,無法提到DNA,而使用植物/真菌DNA試劑盒后提取效果明顯,驗(yàn)證了植物/真菌DNA試劑盒確實(shí)能提取松杉綱植物樣本的DNA。
植物DNA試劑盒操作步驟簡單,但面對(duì)有豐富衍生物的特殊植物樣本也有力不從心的時(shí)候。植物/真菌DNA試劑盒雖然操作步驟略微復(fù)雜,但對(duì)于有各種復(fù)雜衍生物的植物、真菌樣本卻都能應(yīng)付,歡迎大家索要試用裝嘗試一下吧。
·樣本通用性強(qiáng):植物、真菌、糞便、細(xì)菌、動(dòng)物組織、血液均可適用·樣本取樣范圍大:50~200 mg均可適用,特別適合從無法徹底溶解的生物樣本中提取總DNA·操作步驟簡潔、快速,無需蛋白酶K消化及添加乙醇步驟,30-40分鐘內(nèi)即可完成植物總DNA的制備·特殊設(shè)計(jì)的溶解液有效應(yīng)對(duì)植物中的多糖衍生物的干擾·特別優(yōu)化配置的核酸純化柱僅高效吸附大片 查看產(chǎn)品
·1小時(shí)內(nèi)完成植物總DNA的制備·特備適合DNA含量低的植物樣本提取DNA·特別針對(duì)多糖、多酚含量高的植物或真菌樣本設(shè)計(jì) 查看產(chǎn)品