前段時間有客戶詢問說是用Trizol提取大豆種子RNA失敗了，要如何才能提取大豆種子RNA？Trizol作為一種經典RNA提取方法，確實應用廣泛，但在提取植物樣本的RNA時就很容易出現問題。大豆種子中含有較多的蛋白質、脂肪和碳水化合物等豐富的營養物質，最大的可能是大豆種子中的多糖類物質（碳水化合物）和Trizol中的硫氰酸根凝結成了不溶物，導致RNA釋放不出來，從而影響了RNA的提取。

還好小新手頭上有兩種不含硫氰酸根組分的植物RNA試劑盒，一種是植物總RNA試劑盒（Simgen Cat.No.5101050），這款試劑盒與國內知名品牌T***GEN的多糖多酚植物總RNA提取試劑盒的操作步驟、提取效果都是一致的；另一種是高多糖多酚植物總RNA試劑盒（Simgen Cat.No.5103050），這款產品是專門為高多糖多酚樣本而生的，能解決植物總RNA試劑盒束手無策的樣本（有興趣的同學可以了解下這篇文章——《高多糖多酚植物總RNA試劑盒哪家強？》）。接下來就讓小新用兩種試劑盒對比提取一下大豆種子的RNA，看看能否成功，效果又是如何。

實驗目的：

對比Simgen的兩種植物總RNA試劑盒在提取大豆種子RNA時的性能差異。

實驗材料：

新鮮大豆種子、一次性手術刀、研缽

高多糖多酚植物總RNA試劑盒（Simgen Cat.No.5103050）、植物總RNA試劑盒（Simgen Cat.No.5101050）

超微量電子天平（DENVER INSTRUMENT，TP-213）

旋渦震蕩器（越新儀器，XH-C）

臺式離心機（eppendorf Centrifuge 5415 D）

超微量分光光度計（Simgen Cat.No.sim100）

電泳儀（北京六一儀器廠，DYY-6C型）

實驗方法：

由于大豆非常容易研碎，本次實驗采用裂解液浸泡樣本研磨法破碎樣本后提取RNA，具體操作步驟如下：

實驗結果：

1、在超微量分光光度計上用試劑盒內的RNase-Free Water調零，測量洗脫下來的RNA，結果如下：

2、在1%的瓊脂糖凝膠上，加入5 μl洗脫的RNA進行電泳，結果如下：

分析與討論：

1. 由濃度測量結果可以看出Simgen的兩種植物RNA試劑盒均能提出大豆種子中的RNA，植物總RNA試劑盒提取的RNA平均濃度約為275.3 ng/μl，而高多糖多酚植物總RNA試劑盒提取的RNA平均濃度約為489.3 ng/μl，濃度更高；從電泳結果也能看出高多糖多酚植物總RNA試劑盒提取的RNA條帶更亮，與濃度數值有很好的對應關系。因此高多糖多酚植物總RNA試劑盒提取大豆種子RNA的效果更好。

2. 使用植物總RNA試劑盒時，大豆種子加裂解液研磨離心（步驟1）后，會發現有一層白色油脂漂浮于上清液表面，且經過濾柱過濾（步驟2）后仍有殘留（見下圖）。為避免油脂對后續RNA的洗滌和洗脫造成影響，因此增加了步驟3中“此時濾液上層漂浮著一層白色油脂，小心吸取下層液體轉移到一個潔凈的1.5 ml管中”的操作，使得操作變得更麻煩了。

 綜上，雖然兩種試劑盒均能提取大豆種子的RNA，但是高多糖多酚植物總RNA試劑盒效果更好，不僅提取的濃度更高，而且排除了大豆種子中油脂的干擾，操作顯得更為方便。