1、取出細胞、收集上清保存備用 
2、用冷PBS沖洗細胞兩次 
3、加入 1ml Trizol （24孔板每孔加0.5ml即可），調小刻度用移液器吹打細胞至液體澄清（生化：搖動混勻后室溫孵育10min） 
4、將裂解液轉移至1.5ml滅酶EP管中，用黃槍頭加入氯仿0.2ml（1/5 Trizol體積），用手劇烈震搖15秒，置室溫5min（生化：3min dxyer：15min），分層 
5、 4℃、12000g（12300rcf）離心15min，可見分層。 
6、用黃槍頭小心收集上層水相約0.5ml置于另一1.5ml滅酶EP管中（確保不要吸入中間層和有機相）。 
7、各管分別加入0.5ml 異丙醇（等體積），用力搖勻，置室溫10min。（提前將異丙醇4℃預冷，或混勻后置-20℃60min，提取效果更好） 
8、 4℃、 12000g離心10min，可見RNA沉淀。 
9、倒棄上清，用濾紙吸干管口余液，加入預冷的75%滅酶異醇1ml，用指輕彈管壁使RNA沉淀飄起洗滌。
10、4℃、7500g（7700rcf）離心5min，生化為10min，（亦有dxyer用 12000g），沉淀即為總RNA。
11、棄上清，真空干燥約4min或空氣中干燥5~10min，加入20μl（30μl）DEPC 水。 
12、56℃水浴小于10min助溶，取少量測OD值，其余-70℃保存備