1、 取新鮮動(dòng)物組織0.1-0.2g置于組織勻漿器中,加入預(yù)冷的細(xì)胞裂解液1買來,在水浴中迅速勻漿15-30s,以充分研碎組織。然后將細(xì)胞懸浮液吸入另一試管中。
2、 加入2mol醋酸鈉(ph4.0)120μl,充分混勻。
3、 加入1.2ml酚:氯仿:異丙醇,充分混勻搖振10s,冰浴15min。
4、 將混合物轉(zhuǎn)移至1.5mlEP管中,4℃、離心10000r/min,20min。
5、 移取上層水相至另一個(gè)EP管中,加入等體積的異丙醇,20℃,30min沉淀RNA
6、 4℃,離心12000r/min,15min。
7、 棄上清液,加入70%乙醇400ul,洗滌RNA沉淀物被懸浮,則4℃離心10000r/min,10min。
8、 棄上清液,自然干燥,但應(yīng)避免沉淀完全干燥否則RNA難以溶解。
9、 加入100 μl無RNase水重懸RNA,或加1ml無水乙醇和1/10體積3mol醋酸鈉(ph4.0),-70℃保存。