需要準(zhǔn)備的試劑   氯仿、異丙醇、75%乙醇（用RNase-free水配制）、RNase-free的水

1. 勻漿處理（Homogenization）

    直接取新鮮的血液，加入3倍體積紅細(xì)胞裂解液，混勻后室溫放置10分鐘，10000rpm離心1分鐘。徹底吸棄上清，收集白細(xì)胞沉淀。每100-200μl血液收集的白細(xì)胞沉淀加入1ml TRIzol。
2．分層（Phase Separation）
    a. 樣品加入Trizol后，室溫放置5min，使樣品充分裂解。注：如不進(jìn)行下一步操作，樣品可放入-70℃長(zhǎng)期保存。
    可選步驟：4℃ 12000 rpm 離心10分鐘，取上清。
    如果樣品中含有較多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物結(jié)節(jié)部分等，可離心去除。處理脂肪組織樣品時(shí)，上層是大量油脂，應(yīng)除去。取澄清的勻漿溶液進(jìn)行下一步操作。
    b. 每1ml TRIzol加入200μl氯仿，劇烈振蕩混勻后室溫放置3-5 min使其自然分相。
3．RNA沉淀（RNA Precipitation）
    a. 4℃12000rpm離心10-15min。樣品會(huì)分成三層：黃色的有機(jī)相，中間層和無(wú)色的水相，RNA主要在水相中，把水相（通常可吸取550μl）轉(zhuǎn)移到新管中。注：小心吸取水相，千萬(wàn)不要吸取中間界面，否則將導(dǎo)致RNA樣品中有DNA污染。
    b. 在上清中加入等體積冰冷的異丙醇，室溫放置10-20min。4℃ 12,000 rpm離心10min，棄上清，RNA沉淀于管底。
 4．RNA漂洗（RNA Wash）
    a. RNA沉淀中加入1ml 75%乙醇（用RNase-free水配制），溫和振蕩離心管，懸浮沉淀。每1ml Trizol加入1ml 75%乙醇。
    b. 4℃ 5000-8000 rpm離心1-2min，棄上清；短暫快速離心，用移液器小心吸棄上清，注意不要吸棄沉淀。室溫放置1-2分鐘晾干沉淀。
    注：RNA樣品不要過(guò)于干燥，否則很難溶解。
 5. 溶解RNA（Redissolvingthe RNA）
    沉淀中加入50-100μl  RNase-free水，輕彈管壁，以充分溶解RNA，-70℃保存。