方法一：

血凝塊于室溫下自然解凍后，取約1.0cm3的血凝塊樣本，加入適量生理鹽水，浸泡15min，6000r/min離心5min，棄上清。沉淀機械磨碎(勿過度)，加入適量提取液(10mmol/LTris2HCL，100mmol/LNaCl，10mmol/LEDTA，2%SDS)浸泡30min，6000r/min離心5min，棄上清。沉淀中加消化液500μl(10mmol/LTris，1mmol/LEDTA，20g/LSDS，300Lg/ml蛋白酶K)，55℃，2h，其中每隔0.5h顛倒混勻一次，然后于37℃過夜。加等體積飽和酚，充分混勻，10000r/min離心5min；吸取上層水相，加等體積飽和酚：氯仿：異戊醇(25：24：1)；充分混勻，10000r/min離心5min；取上清加氯仿：異戊醇500μ1(24：1)，10000r/min離心5min；取上清加1/10體積的NaAc(3mol/L)，混勻，再沿管壁緩慢加入2倍體積的預(yù)冷無水乙醇，10000r/min離心5min，棄上清；用預(yù)冷75%乙醇洗滌，離心，棄上清，盡量將酒精吸干凈，自然晾干(或真空抽干)；50μl TE溶解(10mmol/LTris，1mmol/LEDTA)。如有不溶物，用蛋白酶K處理后再溶解。-20℃保存

方法二：

3～5 ml 血塊+ 5 ml 溶血試劑→入10 ml 勻漿管勻漿，并用25 ml 溶血試劑洗至50 ml 離心管；4 ℃，3000 r/ min， 10 min →棄上清，沉淀加20 ml 溶血試劑；4 ℃，4 000 r/ min， 10 min →棄上清，沉淀加1. 5 ml 含0. 5 % SDS 的核懸液，輕洗至5 ml 離心管，加20 g/ ml的蛋白酶K10μl ；37 ℃水浴過夜→加等體積平衡酚，混勻，4 ℃，3 500 r/ min， 10 min →小心吸去上層酚溶劑，加等體積氯仿∶異戊醇(24∶1)，混勻，4 ℃， 3 500r/ min， 10 min →輕輕吸取上清液至2 ml 離心管，加1/ 10 體積(約0. 1 ml) 的3 mol/ L NaAc 和等體積異丙醇，輕輕顛倒幾次，可見有白色絮狀物析出→8 000r/ min， 2 min ，棄上清，分別加75 %和無水乙醇洗2次→棄乙醇液，置真空干燥器內(nèi)24 h ，加100μl TE緩沖液溶解DNA， - 20 ℃保存。

方法三：

1、解凍樣品  從-80℃冰箱中取出血樣，在4℃冰箱中解凍，若其后仍有血凝塊，加入適量生理鹽水，浸泡15min，以3000r/min離心5min，棄上清液，取沉淀物

2、裂解紅細胞  將樣品置于15mL離心管內(nèi)，窩旋混勻至血細胞懸起，加入10mL紅細胞裂解液，上下顛倒離心管，4℃環(huán)境放置20min，其間上下顛倒3次，使紅細胞完全裂解.在室溫條件下，以2000r/min離心10min.棄掉上清液，取白色沉淀.用生理鹽水洗滌沉淀，2000r/min離心5min，棄上清液.若洗滌后沉淀不是白色，可重復(fù)上述步驟，直到沉淀呈白色為止，紅細胞裂解液可加至10倍.

3  裂解白細胞  用生理鹽水洗滌白色沉淀，收集白細胞，窩旋混勻至白細胞懸起，加入3mL白細胞裂解液，吹打數(shù)次使沉淀分散，在37℃水浴中孵化（期間可吹打2次）1h，如孵化后仍有細胞團，可再加入1mL白細胞裂解液重復(fù)以上操作，直至溶液透明為止.

4  消化蛋白質(zhì)  向每3mL樣品中加入15μL蛋白酶K，上下顛倒25次，37℃孵化15min，4℃條件下冷卻，加入1mL飽和氯化鈉溶液，窩旋混勻10～20s（可見蛋白凝塊），4℃冰箱中放置10min，在室溫條件下以2000r/min離心10min，應(yīng)于管底部出現(xiàn)沉淀，若沒有或量少，可靜置3～5min，再行離心.

5  DNA的抽提  將上清液移至內(nèi)有3mL異丙醇的試管中，上下緩慢顛倒試管至DNA絲壯物形成，在室溫條件下，以2000r/min離心2min，可見白色DNA沉淀.將上清液棄掉，加入700mL/L乙醇溶液3mL，上下顛倒數(shù)次，洗滌DNA沉淀及管壁，在室溫條件下以2000r/min離心2min，可見白色DNA沉淀.棄掉上清液，加入1mL乙醇，混合均勻，置于離心管內(nèi)，在4℃條件下以13000r/min離心5min，小心移去上清液，將離心管倒立在濾紙上，干燥至DNA團塊呈半透明狀為止.加入TE buffer 250μL，65℃孵化1h，定時彈擊試管壁使溶液混合均勻，在4℃條件下過夜，使DNA水合，分裝于5個冷凍管內(nèi)，于-20℃保存.

方法四：

堿性裂解法

取血凝塊標本于室溫條件下自然溶解，勻漿（可加適量生理鹽水，也可不加），取0.5ml勻漿液（不同劑量標本其相應(yīng)試劑用量按比例計算即可）于1.5ml Eppendorf管中；加入500μl 50mmol/l NaOH溶液，充分混勻后于60℃保溫10min；然后加入50μl 1mol/L Tris-HCl溶液（pH8.0），充分混勻后4℃ 12000r/min 離心10min；小心取上清與另一Eppendorf’管，加兩倍體積預(yù)冷的無水乙醇，充分混勻后于4℃ 12000r/min 離心10min；棄上清，在室溫條件下干燥15min后加入100μl 1×TE buffer 充分溶解；最后將DNA溶液放置于-20℃冰箱備用，保存3個月以上則應(yīng)放入-70℃冰箱。