一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/span>

從種子中提取DNA。

二、實(shí)驗(yàn)材料：

黃豆、面粉、研缽、植物DNA試劑盒（Simgen，Cat.No.3201050）

三、實(shí)驗(yàn)方法：

本次實(shí)驗(yàn)采用Simgen的植物DNA試劑盒方法來提取種子中的DNA，步驟如下：

1. a.黃豆：

稱取黃豆1顆（約200mg），放入研缽中研磨至粉末狀，加入1.5 ml 65℃預(yù)熱的Buffer PL，繼續(xù)研磨，分別吸取600 μl溶解物加入2個1.5 ml 離心管（相當(dāng)于每次從約100mg 黃豆中提取DNA）；

   b.面粉（小麥粉）：

2個1.5 ml 離心管中分別稱取100mg和200mg面粉，加入500ml 65℃預(yù)熱的Buffer PL，旋渦震蕩至充分溶解；

2. 65℃水浴10分鐘，水浴期間每隔2~3分鐘翻轉(zhuǎn)離心管數(shù)次以幫助DNA的釋放；

3. 加入350 μl Buffer K，蓋上管蓋，用力搖晃15秒，旋渦振蕩30秒。13000 rpm離心5分鐘；

4．將離心上清液倒入核酸純化柱中，離心去濾液；

5. 依次用500 μl Buffer WA和600 μl Buffer WB過柱洗滌；

6. 最高速離心，去除純化柱上殘留的乙醇；

7. 將核酸純化柱置于一個潔凈的1.5ml離心管中，用60 μl 65℃預(yù)熱的Buffer TE 洗脫DNA；

8. 在微量紫外分光光度計上測量DNA的濃度；

9. 瓊脂糖凝膠電泳。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

1. 在微量紫外分光光度計上用Buffer TE調(diào)零，測量洗脫下來的DNA，結(jié)果如下：

2. 在0.6%的瓊脂糖凝膠上，加入8μl提取到的DNA，電泳30 分鐘，結(jié)果如下：

1、2：大豆DNA    3：100 mg面粉提取的DNA    4：200 mg面粉提取的DNA    M：DL15000 DNA Marker

五、討論與分析：

1．用Simgen植物DNA試劑盒能提取到黃豆、面粉（小麥粉）的DNA，說明在干燥的種子中，DNA保存得比較完整。

2．面粉DNA的電泳條帶顯示有明顯的拖尾現(xiàn)象，產(chǎn)生了類似凋亡細(xì)胞的DNA帶型。推測是由于種子被磨碎后，DNA更容易失去組蛋白的保護(hù)，從而形成凋亡細(xì)胞的DNA帶型。

3．由于植物種子中DNA含量較低，可適度提高樣本的用量（以面粉DNA提取為例），但樣本用量不應(yīng)大于200mg。以200 mg面粉提取DNA為例，樣本加入裂解液（Buffer PL）水浴后變得非常粘稠，操作變得困難，且DNA回收量與100mg相比也沒有成倍地增長。

4．植物種子通常會含有大量的蛋白、油脂、多糖（淀粉為主），Simgen植物DNA試劑盒在提取過程中能很好地抵御這些干擾。

Simgen實(shí)驗(yàn)室