一、實驗目的：

從火龍果果肉中提取RNA。

二、實驗材料：

新鮮的火龍果、研缽、植物果肉總RNA試劑盒（Simgen，Cat.No.5102050）、植物總RNA提取試劑盒（Simgen，Cat.No.5101050）。

三、實驗方法：

本次實驗嘗試用Simgen的植物果肉總RNA試劑盒和植物總RNA提取試劑盒兩種方法來提取RNA。

四、實驗步驟：

植物果肉總RNA試劑盒提取步驟：

1. 用1.5 ml 離心管稱取500 mg火龍果果肉，加入200 μl 已加入β-巰基乙醇的Buffer RLP，研磨棒研磨至組織完全溶解，再補加300 μl 已加入β-巰基乙醇的Buffer RLP，使最終加入Buffer RLP的總體積為500 μl。混勻后13000 rpm 離心2分鐘；

*由于火龍果果肉容易破碎，本實驗采用研磨棒磨碎果肉。

2. 吸取≤ 700 μl的離心上清到過濾柱中，離心取濾液；

3．向濾液中加入700 μl 70％乙醇，混勻后取700 μl混合液加入到核酸純化柱中，離心去濾液；

4. 將剩余的混合液加入到核酸純化柱中，再次離心棄濾液；

5. 依次用500 μl Buffer WA和600 μl Buffer WBR過柱洗滌；

6. 最高速離心，去除純化柱上殘留的乙醇；

7. 將核酸純化柱置于一個潔凈的RNase-free的1.5 ml離心管中，用50 μl RNase-Free Water洗脫RNA；

8. 在微量紫外分光光度計上測量RNA的濃度；

9. 瓊脂糖凝膠電泳。

植物總RNA提取試劑盒提取步驟：

1. 離心管稱取100 mg火龍果果肉，加入100 μl 已加入β-巰基乙醇的Buffer RLC，研磨棒研磨至組織完全溶解，，再補加500 μl 已加入β-巰基乙醇的Buffer RLC，使最終加入Buffer RLC的總體積為600 μl。 

*由于火龍果果肉容易破碎，本實驗采用研磨棒磨碎果肉。

2. 將組織的溶解物全部轉移到過濾柱中，離心取濾液；

3. 向濾液中加入600 μl 70％乙醇，混合后取600 μl混合液加入到核酸純化柱中，離心棄濾液；

4. 將剩余的混合液加入到核酸純化柱中，再次離心棄濾液；

5. 依次用500 μl Buffer WA和600 μl Buffer WBR過柱洗滌；

6. 最高速離心，去除純化柱上殘留的乙醇；

7. 將核酸純化柱置于一個潔凈的RNase-free的1.5 ml離心管中，用50 μl RNase-Free Water洗脫RNA；

8. 在微量紫外分光光度計上測量RNA的濃度；

瓊脂糖凝膠電泳。

五、實驗結果：

1. 在微量紫外分光光度計上用RNase-Free Water調零，測量洗脫下來的RNA，結果如下：

1、2是用植物果肉總RNA試劑盒純化獲得的總RNA；3、4是用植物總RNA提取試劑盒純化獲得的總RNA。

2. 在1%的瓊脂糖凝膠上，加入5 μl提取到的RNA，電泳20 min，結果如下：

六、討論與分析：

1．從結果上分析用Simgen的植物果肉總RNA試劑盒和Simgen植物總RNA提取試劑盒都能提取到火龍果果肉的RNA。

2．用Simgen植物果肉總RNA試劑盒能夠提取的樣本量是植物總RNA提取試劑盒的5倍，因此提取到的RNA濃度更高。

    植物RNA的提取過程經常是Trizol試劑使用者的噩夢，究其原因，無一例外是因為植物組織中多糖（特別是淀粉類物質）衍生物的干擾：因為Trizol試劑中所含的硫氰酸胍遇到多糖類物質便凝結成膠凍狀，阻止了RNA的進一步釋放。當植物組織含有大量水分（比如果肉）時，就是多糖加RNA含量低的雙重阻撓了——這時候選用Simgen果肉總RNA試劑盒提取RNA確實是省時省力的好辦法。

 Simgen實驗室