實(shí)驗(yàn)室飛進(jìn)了一只蒼蠅，被抓住后想起有用戶咨詢果蠅DNA提取相關(guān)的問(wèn)題，于是這只倒霉的蒼蠅就變成了實(shí)驗(yàn)材料，用于測(cè)試從昆蟲中提取DNA的效果。

一、實(shí)驗(yàn)材料：新鮮存活的蒼蠅、研磨棒、動(dòng)物組織DNA試劑盒（simgen，Cat.No.3101050）、植物DNA試劑盒（simgen，Cat.No.3201050）

二、實(shí)驗(yàn)方法：

本次實(shí)驗(yàn)用手術(shù)刀將一只蒼蠅均分為兩半，分別嘗試了用Simgen的動(dòng)物組織DNA試劑盒和植物DNA試劑盒提取DNA。

三、實(shí)驗(yàn)步驟：

動(dòng)物組織DNA試劑盒提取步驟：

1. 將半只蒼蠅（約70 mg）置于1.5 ml離心管中，入180 μl Buffer AT，用研磨棒直接在離心管中充分研磨、搗碎；

2. 加入20 μl蛋白酶K貯存液，56℃水浴10分鐘，期間漩渦振蕩數(shù)次幫助組織溶解；

3. 加入200 μl Buffer SL，旋渦振蕩約15秒混勻，將離心管置于70℃水浴10分鐘；

4. 13000 rpm離心1分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到裝有200 μl無(wú)水乙醇的1.5 ml 離心管中，混勻；

5. 將混合液轉(zhuǎn)移到核酸純化柱中，離心去濾液；

6. 依次用500 μl Buffer WA和600 μl Buffer WB洗滌；

7. 用100 μl 56℃溫育的Buffer TE洗脫DNA；

8. 在微量紫外分光光度計(jì)上測(cè)量DNA的濃度；

9. 瓊脂糖凝膠電泳。

植物DNA試劑盒提取步驟：

1. 將半只蒼蠅（約70 mg）置于1.5 ml離心管中，加入500 μl Buffer PL，用研磨棒直接在離心管中充分研磨；

2. 65℃水浴10分鐘，期間每隔2~3分鐘翻轉(zhuǎn)離心管數(shù)次以幫助DNA釋放；

3. 加入350 μl Buffer K，蓋上管蓋，用力搖晃15秒，漩渦振蕩30秒，13000 rpm離心5分鐘；

4. 將上清液轉(zhuǎn)移到核酸純化柱中，離心去濾液；

5. 依次用500 μl Buffer WA和600 μl Buffer WB洗滌；

6. 用100 μl 65℃溫育的Buffer TE洗脫DNA；

7. 在微量紫外分光光度計(jì)上測(cè)量DNA的濃度；

8. 瓊脂糖凝膠電泳。

7. 用100 μl 56℃溫育的Buffer TE洗脫DNA；

8. 在微量紫外分光光度計(jì)上測(cè)量DNA的濃度；

9. 瓊脂糖凝膠電泳。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

在微量紫外分光光度計(jì)上用Buffer TE調(diào)零，測(cè)量洗脫下來(lái)的DNA，結(jié)果如下，

從圖一的數(shù)據(jù)上可以看出植物DNA試劑盒提取到的核酸樣品濃度要遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于動(dòng)物組織DNA試劑盒提取到的樣品濃度，有10倍的濃度差異！不過(guò)用動(dòng)物組織DNA試劑盒提取到的樣本260/280達(dá)到2.0以上，懷疑其中的RNA殘留比較多，作進(jìn)一步電泳分析。

2、 在1%的瓊脂糖凝膠上，加入5 μl提取到的DNA，電泳15 min，結(jié)果如下，

五、分析與討論：

經(jīng)過(guò)電泳的進(jìn)一步分析，我們得出了一些很有價(jià)值的結(jié)論和推斷：

1. 用Simgen的動(dòng)物組織DNA試劑盒和植物DNA試劑盒都能提取到昆蟲的DNA。但出乎意料的是，植物DNA試劑盒提取到的DNA純度更好，表現(xiàn)在RNA殘留很少。

2. 動(dòng)物組織DNA試劑盒方法獲得的DNA電泳檢測(cè)觀察到有一團(tuán)異常明顯的拖尾，由于樣本是鮮活的蒼蠅，可以推斷是大量的RNA殘留。因此用動(dòng)物組織DNA試劑盒提取鮮活處死的昆蟲時(shí)，必須添加RNase A（Simgen Cat.No.: 8001001）處理，以除去RNA殘留的干擾。

3. 至于植物DNA試劑盒方法獲得的DNA僅含少量的RNA，其原因推斷如下：植物DNA試劑盒的方法在65℃處理時(shí)，昆蟲體內(nèi)內(nèi)源性的RNA酶未被失活，RNA降解得比較充分，因而RNA殘留較少；而動(dòng)物組織DNA試劑盒在加入蛋白酶K消化蛋白的過(guò)程中（56℃水浴），同步也滅活了昆蟲體內(nèi)內(nèi)源性的RNA酶，所以殘留了大量的未充分降解的RNA。

4. 再次驗(yàn)證了單憑分光光度計(jì)估算核酸濃度是不可靠的，有必要用電泳進(jìn)行復(fù)核。

果蠅是遺傳學(xué)研究中常用的模式生物之一，是生物學(xué)研究中的重要材料。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，現(xiàn)代遺傳學(xué)研究中很多都需要提取果蠅的DNA。果蠅和蒼蠅都屬于昆蟲綱雙翅目，形態(tài)上也非常接近，既然我們測(cè)試的方法能從蒼蠅中提取到DNA，那么理論上也能從果蠅中提取到DNA。但需要注意的是，1只果蠅的質(zhì)量大約只有1 mg，半只蒼蠅（質(zhì)量約70 mg）能提取到大約10 μg DNA，那么從單只果蠅中提取到的DNA量很可能會(huì)少于1μg，如果需要大量DNA的話，需要多只果蠅一起提取。

Simgen實(shí)驗(yàn)室