前段時間有個客戶在新景實驗室做物種鑒定方面的實驗，由于樣本比較珍貴，希望能挑選到一款性能更好的試劑盒，因此自帶了一盒Ta**Ra MiniBEST Universal Genomic DNA Extraction Kit，想與Simgen的動物組織DNA試劑盒比較一下性能。對于這種需求，我們也很感興趣，現在我們將測試結果公布一下：

實驗目的：

對比Simgen和Ta**Ra兩個品牌的動物組織DNA試劑盒的性能差異。

實驗材料：

客戶提供的牛垂體組織（曬干），一次性手術刀片，Simgen動物組織DNA試劑盒（Cat.No.3101050），Ta**Ra MiniBEST Universal Genomic DNA Extraction Kit，2×Taq Plus PCR Master Mix（Simgen，Cat.No.7005100），特異性引物（客戶提供，具體序列未知，擴增的目的片段在200 bp左右）。

實驗方法：

1. 用一次性手術刀片將垂體組織切碎，按每管20 mg的重量稱取4管，分別用Simgen和Ta**Ra兩個公司的試劑盒提取2管垂體組織的DNA。

2. 在超微量分光光度計上測量提取的DNA濃度。

3. 取5 μl洗脫的DNA作為模板，用2×Taq Plus PCR Master Mix進行PCR擴增。

操作步驟對比：

實驗結果：

1. 在超微量分光光度計上分別用Elution Buffer/Buffer TE調零，測量洗脫下來的DNA，結果如下（T1、T2：Ta**Ra試劑盒；S1、S2：Simgen試劑盒）：

1. 在2%的瓊脂糖凝膠上，加入5 μl PCR擴增產物，電泳30分鐘，結果如下：

分析與討論：

1. 從操作步驟上來看，兩家公司的試劑盒相似度很高，但是Simgen的操作步驟相對來說離心時間更短，洗滌步驟也只需兩步，比Ta**Ra的三步洗滌更簡便。

2. 在蛋白酶K消化組織的步驟中，當Simgen試劑盒提取的兩管垂體組織完全溶解的時候，Ta**Ra試劑盒提取的兩管垂體組織還有明顯的未溶解顆粒。可能是因為Simgen公司的試劑盒中消化緩沖液Buffer AT性能優(yōu)于Ta**Ra試劑盒中的Buffer GL。

3. Simgen試劑盒提取的DNA濃度較Ta**Ra試劑盒更高；且OD₂₆₀/OD₂₃₀比值達到2.0以上；Ta**Ra試劑盒提取的DNA濃度不到Simgen試劑盒提取的濃度的一半，且OD₂₆₀/OD₂₃₀比值均低于2.0。

4. 從PCR電泳圖可以看到兩個公司的試劑盒提取的DNA均能夠擴增出目的條帶，但Simgen的條帶較Ta**Ra稍亮一些，這與測得的DNA濃度有對應的相關性。

5. 專業(yè)分析：一個優(yōu)質的核酸純化試劑盒由兩大部件組成：緩沖液+純化柱。Ta**Ra試劑盒消化DNA的時間長，洗滌次數多，說明其試劑盒的緩沖液還需要進一步優(yōu)化。

6. 專業(yè)分析：Ta**Ra試劑盒提取的DNA濃度較Simgen試劑盒低了一半，已經不僅僅能用緩沖液的差異來解釋了，說明其選用的純化柱有兩種可能存在的缺陷：1.最常見的是純化柱失效問題，就是說純化柱吸附DNA的能力下降了。2. 純化柱的優(yōu)化問題，如果Ta**Ra選擇了非常致密的膜吸附基因組DNA，雖然DNA的吸附效率非常高，但是會導致大片段的DNA很難被洗脫下來，結果就是不僅基因組DNA的回收率低，還很容易滯留鹽分，典型的特點是OD₂₆₀/OD₂₃₀比值偏低。綜合來看，第二種純化柱缺陷的可能性偏大，當然這只是猜測，具體還需要Ta**Ra公司的技術人員自己去核實。

Simgen實驗室

2019.11.27