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真菌菌絲PCR
實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
通過不同的方法處理真菌菌絲并進(jìn)行PCR，看是否能擴(kuò)出條帶。
實(shí)驗(yàn)設(shè)備與材料
快速DNA提取檢測(cè)試劑盒（simgen）、
2×Taq Plus PCR Master Mix（simgen）、
水浴鍋（XMTD-6000，上海宜昌儀器紗篩廠）、
離心機(jī)（5452，德國(guó)eppendorf股份公司）、
PCR儀（A-80343,Progene）、
漩渦振蕩儀（XH-C，金壇市醫(yī)療儀器廠）。
實(shí)驗(yàn)方法及步驟
方法1：使用快速DNA提取檢測(cè)試劑盒
取真菌菌絲與潔凈的1.5ml離心管，加100μl裂解液，用研磨棒將菌絲研磨破碎，再加10μl蛋白酶K混勻，56℃水浴10min，95℃水浴5min（由于蛋白酶K會(huì)消化Taq酶，所以要使蛋白酶K失活，以免Taq酶被消化），取75μl 上清作為PCR模板待用。
配置PCR擴(kuò)增體系，加1/10體積模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增
組成成分 | 使用量 |
2×Taq Plus PCR Master Mix | 20 μl |
Primer 正向（10 μM） | 1μl |
Primer 反向（10 μM） | 1μl |
ddH2O | 14μl |
模板 | 4μl |
方法2：直接PCR
配置PCR擴(kuò)增體系，將菌絲直接加入體系中進(jìn)行PCR擴(kuò)增
組成成分 | 使用量 |
2×Taq Plus PCR Master Mix | 20 μl |
Primer 正向（10 μM） | 1μl |
Primer 反向（10 μM） | 1μl |
ddH2O | 18μl |
模板 | 菌絲 |
擴(kuò)增程序：
擴(kuò)增產(chǎn)物4℃保存。
取PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
·產(chǎn)品中添加的Taq酶抗體、PCR增強(qiáng)劑和蛋白穩(wěn)定劑協(xié)同提高了PCR效率和靈敏度·Taq和Pfu酶協(xié)同作用，既兼顧了擴(kuò)增產(chǎn)物的高保真性，又保證了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度，可以從基因組DNA中擴(kuò)增出長(zhǎng)達(dá)4kb的片段或者從λDNA中擴(kuò)增出長(zhǎng)達(dá)5kb的片段 查看產(chǎn)品
試劑盒-ut-20241206031457.jpg)
·提取過程無(wú)需液氮研磨、無(wú)需有機(jī)溶劑抽提，無(wú)需無(wú)水乙醇沉淀，簡(jiǎn)便、快捷，并且質(zhì)量穩(wěn)定可靠 ·優(yōu)化的2× PCR Mix包容性強(qiáng)，在少量PCR抑制物存在的情況下仍能進(jìn)行高效特異擴(kuò)增·靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，特別適合于高通量的篩選·&n 查看產(chǎn)品