某天風和日麗，我像往常一樣去公司上班，一到辦公室，銷售部的小伙伴就跑來向我抱怨：“小新啊，最近公司的凝膠回收試劑盒是不是質檢不過關？我已經接到好幾個投訴電話了！！！”

我：“你說啥！！？？怎么可能，出貨前都檢驗了，沒有問題啊！！！”

在小伙伴滿臉懷疑的表情下，我還是果斷的再檢測了一次，對比之后拿到了數據，分分鐘甩了出來。

“不是吧？！85%的回收率客戶還嫌低？”

“可是客戶反映只有不到50%啊……”

為了實力證明產品的質量，我決定去客戶的實驗室走一趟。（這么近，不去多不好啊……）一上午時間搞定，回來之后小伙伴問我怎么樣。為什么我們自己檢測的數據與客戶做出的結果差距如此之大？下面就由小新為大家解答：凝膠回收過程中有哪些容易被忽略的要點。

對照組采用無損失凝膠回收：（每組實驗均有兩個重復）

30μl+120μl凝膠作為樣品，然后通過正常的凝膠回收實驗操作步驟（參照杭州新景生物試劑凝膠回收試劑盒說明書）。

第一組實驗組：凝膠塊薄厚差異（每組實驗均有兩個重復）

客戶制膠相對較薄，實驗室制得膠比較厚。這會兒估計會有小伙伴說了，做那么厚的膠豈不是浪費嗎？然而真的是浪費嘛？我們來看圖片

（圖1：薄膠樣為仿客戶制膠）

（圖2：厚膠樣為實驗室制膠）

從圖上我們可以很明顯的看出圖1的凝膠較薄，在跑樣孔附近有凸起，且整塊膠薄厚不均勻，圖2的膠明顯厚度均勻，沒有明顯的凸起凹陷。

那么為什么薄的膠會出現不均勻的現象呢？這在物理學上被稱之為“毛細作用”（毛細作用：是由分子表面張力引起的，由表面張力和分子與另一種分子之間的親和力引起的。以上來自百度百科）。

那么薄厚不同的膠，會對最終凝膠回收效率有什么影響呢？

我們在兩塊厚薄不同的膠中添加了30μl同樣的DNA樣本，然后通過正常的凝膠回收實驗操作步驟（參照杭州新景生物試劑凝膠回收試劑盒說明書），得到了最終的一份實驗數據。與此同時，我們還進行了第二組實驗。

第二組實驗：跑膠時間對實驗結果的影響（每組實驗均有兩個重復）

點完樣，稍等片刻，我們再來觀察實驗結果。

小新跑膠結束啦，為了效果更明顯，我們需要在側面觀察側面觀察DNA在凝膠中的狀態：

圖3 ：1號組厚膠電泳15分鐘效果

 圖4：2號組厚膠電泳30分鐘效果

 圖5：薄膠電泳15分鐘效果

 圖6：3號組薄膠電泳30分鐘效果

通過對比圖3和圖4（或者圖5和圖6），均可看出，隨著電泳時間的加長，DNA條帶出現明顯的擴散。如果凝膠比較厚，如圖4，大部分DNA還保留于凝膠中，但是相對較薄的凝膠，如圖6，估計得有一半的DNA都跑到電泳緩沖液中了。當然，直觀感受沒有依據那么我們就用數據說話，接下來繼續切膠回收。

實驗結果：每組實驗均有兩個重復（真相終于要浮出水面啦~）

1號、2號、3號實驗組的平均回收效率分別為：85.8%、61.8%、37%（看看，這就是區別！！！）。由此我們可以總結出：在凝膠回收的過程中盡量做相對厚一點的膠（為了回收效率就別在意那么一點點膠啦~），最大可能避免毛細作用導致膠體不均勻進而影響回收效率；此外盡可能不要過長時間的電泳，不然大部分的DNA都從凝膠膠體里跑到電泳緩沖液中的話，回收率當然就低啦！回收過程中還要將凝膠塊融化完全，以避免堵塞純化柱。當然這種小的細節相信大家都知道啦。好了今天的小新課堂就到這里了，下期再會！

杭州新景生物試劑開發有限公司實驗室

2016年1月26日