前段時間有家做過濾器材的公司（后文簡稱A公司）找到我們，說是可以給我們提供核酸純化柱。雖然Simgen的核酸純化柱都是自產(chǎn)的，但是出于好奇，我們還是要了一些試用裝，測試它的核酸吸附效率以及穩(wěn)定性。現(xiàn)在我們把測試方法分享給大家，作為核酸純化柱選擇的一個依據(jù)。

（一）實驗?zāi)康?/strong>

對比測試Simgen核酸純化柱和A公司核酸純化柱的性能。

（二）實驗材料與設(shè)備：

1. 新鮮培養(yǎng)的質(zhì)粒菌

2. 快速質(zhì)粒DNA小量試劑盒（Simgen Cat.No.1005050）、A公司提供的質(zhì)粒DNA純化柱

3. 臺式離心機（eppendorf Centrifuge 5415 D）

4. 旋渦振蕩器（越新儀器，XH BH-C）

5. 超微量分光光度計（Simgen Cat.No.Sim-100）

6. 電泳儀（北京六一儀器廠，DYY-6C型 ）

7. 電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司，DNP-9082）

（三）實驗內(nèi)容：

1. 12000 rpm離心30秒收集5管3 ml過夜培養(yǎng)的細菌，棄盡培養(yǎng)基。加入250 μl已加入RNase A 的Buffer I，充分懸浮沉淀的細菌。

2. 加入250 μl Buffer II，溫和并充分地翻轉(zhuǎn)離心管4-6次。

3. 加入350 μl Buffer N8，溫和并充分地翻轉(zhuǎn)離心管直至溶液中殘留的藍色沉淀全部消失，轉(zhuǎn)變?yōu)榈S色沉淀。

4. 13200 rpm離心2分鐘。

5. 將所有上清液倒入50 ml離心管中，混合均勻，各取2個Simgen公司和A公司的核酸純化柱置于2 ml離心管中，吸取800 μl混勻的上清液加入到各個核酸純化柱中，蓋上管蓋，12000 rpm離心30秒。

6. 棄2 ml離心管中的濾液，將核酸純化柱置回到2 ml離心管中，在核酸純化柱中加入800 μl Buffer W2，蓋上管蓋，12000 rpm離心30秒。

7. 棄2 ml離心管中的濾液，將核酸純化柱置回到2 ml離心管中，最高速13200 rpm離心1分鐘。

8. 棄2 ml離心管，將核酸純化柱置于一個潔凈的1.5 ml離心管中，在純化柱的膜中央加入60 μl Buffer E，蓋上管蓋，室溫靜置1分鐘，12000 rpm離心30秒。

9. 在超微量分光光度計上測量洗脫的質(zhì)粒DNA的濃度并進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。

10. 各取10個Simgen公司和A公司的核酸純化柱，在50℃恒溫箱中放置7天，7天后各取出2個核酸純化柱，再加上2個Simgen公司同一批的未放入恒溫箱的純化柱，按步驟1-9再測試一遍。

（四）實驗結(jié)果：

1. 在超微量分光光度計上用Buffer E調(diào)零，測量洗脫的質(zhì)粒DNA，結(jié)果如下：

樣本編號0為常溫放置7天的Simgen核酸純化柱，樣本編號1為50℃放置7天的Simgen核酸純化柱，樣本編號2為50℃放置7天的A公司核酸純化柱。 

2. 在1%的瓊脂糖凝膠上，加入5 μl提取到的質(zhì)粒DNA，電泳20分鐘，結(jié)果如下：