1. 挑取大腸桿菌菌單菌落，培養(yǎng)至穩(wěn)定期，取菌液 2.0 mL 于2.0 mL離心管離心得菌體。

2. 每管加入 1 mL Trizol 溶液，蓋緊管蓋，激烈振蕩15 s，室溫靜置5 min 4℃，12000 g，離心 10 min；取上清轉(zhuǎn)入(約 1 mL)新的 2.0 m L離心管中。

3. 每管加入 0.2 mL 的氯仿(0.2倍 體積 Trizol)，蓋緊蓋，劇烈振蕩 15 s；室溫靜置 3 min；4℃, 12000 g, 離心 10 min；小心吸取上層水相，轉(zhuǎn)入另一新的 2.0mL 離心管，測量其體積；（加氯仿時(shí)應(yīng)充分震蕩使其充分乳化。）

4. 加入1倍體積的氯仿，蓋緊蓋，劇烈振蕩 15 s；室溫靜置 3 min；4℃，12000 g，離心 10 min；小心吸取上層水相，轉(zhuǎn)入另一已編號新的 2.0mL 離心管。

5. 加入 0.5 mL 的異丙醇(0.5 倍體積 Trizol)，輕輕顛倒混勻；室溫，靜置 10 min；4℃，12000 g，離心 10 min，RNA 沉于管底；小心吸去上清。

6. 加1 mL75%的乙醇(預(yù)冷)，并輕柔顛倒，洗滌沉淀；4℃，7500 g，離心 5 min。

小心棄上清，微離，吸去剩余乙醇，室溫干躁 10 min。

7. 各管用 30μL DEPC 處理過的雙蒸去離子水溶解，55-60℃溫育5 min，分裝，-80℃貯存(可貯存5周)。