1. 細菌的生長狀態:實驗中應密切注視細菌的生長狀態和密度,盡量使用對數生長期的細胞(一般通過檢測OD600來控制。DH5α菌株 OD600為 0.5 時細胞密度是 5 × 107/ml );
2. 所有操作均應在無菌條件和冰上進行;
3. 經 CaCl2處理的細胞,在低溫條件下,一定的時間內轉化率隨時間的推移而增加,24小時達到最高,之后轉化率再下降(這是由于總的活菌數隨時間延長而減少造成的);
4. 化合物及無機離子的影響:在Ca2+的基礎上聯合其他二價金屬離子(如 Mn2+或 Co2+)、 DMSO 或還原劑等物質處理細菌,可使轉化效率大大提高( 100-1000倍);
5. 所使用的器皿必須干凈。跡量的去污劑或其它化學物質的存在可能大大降低細菌的轉化效率;
6. 質粒的大小及構型的影響:用于轉化的應主要是超螺旋的DNA;
7.一定范圍內,轉化效率與外源 DNA 的濃度呈正比。
pUC-19載體是小分子量、高拷貝的大腸桿菌質粒,長度均為2,686 bp。 查看產品
·一種常用于質粒克隆的菌株。·其φ80lacZ△M15基因的產物可與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現α互補,可用于藍白斑篩選。·recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。 查看產品
·用于藍白斑篩選;·recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。 查看產品
·該菌株用以T7 RNA 聚合酶為表達系統的高效外源基因的蛋白表達宿主。·T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達受控于λ噬菌體DE3區的lacUV5啟動子,該區整合于BL21的染色體上。·該菌適合于非毒性蛋白的表達。 查看產品
·TOP10菌株轉化效率高達108以上。·適用于高效的DNA克隆和質粒擴增。·能保證高拷貝質粒的穩定復制 查看產品