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如何提高感受態細胞的轉化率?

作者:新景實驗室
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1. 細菌的生長狀態實驗中應密切注視細菌的生長狀態和密度盡量使用對數生長期的細胞(一般通過檢測OD600來控制DH5α菌株 OD6000.5 時細胞密度是 5 × 107/ml )

2. 所有操作均應在無菌條件冰上進行

3.  CaCl2處理的細胞在低溫條件下一定的時間內轉化率隨時間的推移而增加24小時達到最高之后轉化率再下降(這是由于總的活菌數隨時間延長而減少造成的)

4. 化合物及無機離子的影響Ca2+的基礎上聯合其他二價金屬離子(Mn2+ Co2+)DMSO 或還原劑等物質處理細菌可使轉化效率大大提高( 100-1000)

5. 所使用的器皿必須干凈跡量的去污劑或其它化學物質的存在可能大大降低細菌的轉化效率

6. 質粒的大小及構型的影響用于轉化的應主要是超螺旋的DNA

7.一定范圍內轉化效率與外源 DNA 的濃度呈正比

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