不同公司的RNasin產(chǎn)品性能的對比

一、實驗?zāi)康模?/strong>

通過RT-PCR實驗，對寶生物（Takara）和新景生物的RNasin產(chǎn)品的性能效果進行對比。

二、實驗材料及設(shè)備：

Trizol 柱純化總RNA試劑盒（simgen）、

Fast 1st strand cDNA Synthesis Kit(with gDNase)（simgen）、

2×SYBR Green PCR Mix（simgen）、

50×ROX Reference Dye（simgen）、

水浴鍋（XMTD-6000，上海宜昌儀器紗篩廠）、

離心機（5452，德國eppendorf股份公司）、

ABI PRISM®7000熒光PCR儀（7000，美國ABI公司）、

漩渦振蕩儀（XH-C，金壇市醫(yī)療儀器廠）。

三、實驗方法：

設(shè)計：

四、實驗步驟：

1.RNA提取

按照Trizol 柱純化總RNA試劑盒（simgen）說明書操作提取RNA，用50 μl RNase-free水洗脫。

2.RNasin抑制RNase反應(yīng)

按下表配置反應(yīng)體系：

注：為是RNasin與RNase充分結(jié)合，所以需將RNasin和RNase先混合在一起；為使其他組分均勻，所以應(yīng)多管一起配置，混勻后再分裝至各管，如配置10管量時：

每管分裝7μl，然后在將混合后的RNasin和RNase混合加入，補RNase-free H₂O至10μl，混勻。37℃30min使RNase反應(yīng)，4℃保存待用。

3.cDNA合成

按Fast 1st strand cDNA Synthesis Kit(with gDNase)（simgen）說明書操作。

4.熒光PCR檢測

按2×SYBR Green PCR Mix（simgen）說明書操作。

五、實驗結(jié)果：

六、討論與分析：

1.從圖一、圖二中可看出，當(dāng)RNase的量增多時，cDNA的起始濃度會降低，說明RNasin只對一部分量的RNase產(chǎn)生抑制。未抑制的RNase仍會對RNA產(chǎn)生影響；

2.從圖三到圖六可以看出，在相同量的RNase和RNasin情況下，不同公司RNasin對RNase的抑制效果是不同的，新景生物的RNasin抑制RNase活性的效果比Takara生物的RNasin的抑制RNase活性的效果好；

3.從圖七可以看出，在相同RNasin的量下，新景生物的RNasin對4ngRNase的抑制效果比Takara生物的RNasin對2ngRNase的抑制效果好，且新景生物的RNasin對8ng RNase的抑制效果接近Takara生物的RNasin對2ngRNase的抑制效果。