方法一：改良TES水浴法

將蠟塊組織切片為10μm大小，修剪掉多余的石蠟，取10片置于1.5ml Eppendorf 管中，加入1ml TES溶液充分振蕩10min，70℃水浴30min，15000r/min 離心15min，棄上清，重復(fù)2次。最后1次棄去上清后向管中加入500μl 消化緩沖液，再加入20μl 蛋白酶K （質(zhì)量濃度5mg/ml），置于55℃水浴過(guò)夜。在沸水中水浴10min，以滅活蛋白酶K。加入等體積飽和酚氯仿-異戊醇（25:24:1），重復(fù)抽提3次。最后取上層水相，加入無(wú)水乙醇沉淀。70%乙醇充分洗滌DNA，空氣干燥，加入50μl TES 溶液溶解，置于-20℃保存?zhèn)溆谩?/span>

方法二：二甲苯脫蠟法

將蠟塊組織切片10μm ，加入1ml 二甲苯溶液。在37℃水浴中輕搖10min ，4000 r/min 離心15min ，小心吸去二甲苯，重復(fù)兩次。棄去二甲苯后加入1ml 無(wú)水乙醇洗滌，再依次用95%、75%、25%乙醇進(jìn)行梯度水化。棄去上清后向管中加入500μl 消化緩沖液，再加入 20μl 蛋白酶K（質(zhì)量濃度為5mg/ml），置于55℃水浴中過(guò)夜。加入等體積飽和酚氯仿-異戊醇重復(fù)抽提3次。最后取上層水相經(jīng)過(guò)沉淀、洗滌、干燥后，于-20℃保存?zhèn)溆谩?/span>

方法三：無(wú)需脫蠟法（Goelz 法改良）

1、取出已分裝好的石蠟組織片，切除多余的石蠟，暴露組織

2、將組織切碎（最大徑<0.5mm），稱重，放置于2ml 離心管中

3、加入TE9提取液1ml ，高速混懸2~3min，與48℃水浴郭中放置24h。（TE9 DNA提取液的制備：500mmol/L Tris ；20mmol/L EDTA；10mmol/LNaCl；1%SDS；500μg/ml；pH8.0）

4、再次混懸組織，加入蛋白酶K至終濃度1mg/ml，SD至2%，孵育24-36h（組織消化完全為宜，微量管液體分層，上層為蠟溶液渾濁層，下層為組織消化澄清液)

5、用等體積酚-氯仿溶液抽提3次，全速離心后可見(jiàn)明顯分層，抽提過(guò)程中小心抽吸，避開(kāi)上層蠟層及下層酚相層，吸取中間清亮層；

6、轉(zhuǎn)移上清，加入1/10體積3 M冰凍的NaAC溶液和等體積異丙醇室溫放置過(guò)夜，次日離心(12000 r/min，10 min)，收集DNA沉淀；

7、沉淀物用70%乙醇洗1次，去除多余鹽分。

8、沉淀干燥后溶于20μTE緩沖液(pH7.2)，加入1 μl RNA酶，放置于-4℃冰箱備存。

方法四：脫蠟法

(1)脫蠟：

①將石蠟包埋的組織標(biāo)本切片5-8片(5μm/每片)，放入1.5ml離心管中；

②加入1 ml二甲苯，顛倒混勻，使二甲苯與組織充分接觸，放置于48℃水浴鍋中45分鐘；

③離心(12 000 r/rain，10min)，棄上清；

④重復(fù)前兩步(即用二甲苯脫蠟兩次)；

⑤加入1 ml無(wú)水乙醇，翻轉(zhuǎn)混勻，離心(12000r/min，10 min)，棄上清，以去除殘留二甲苯，此過(guò)程也重復(fù)兩次。

⑥棄上清后，將已脫蠟組織放置于超凈臺(tái)自然干燥。

(2)蛋白酶消化：于脫蠟后組織中加入細(xì)胞裂解液200μl，蛋白酶K(20 mg/ml)15 m，混勻，于37℃水浴鍋中溫浴至混合物清亮(37-48 h)。在消化過(guò)程中，消化24小時(shí)時(shí)補(bǔ)加一次蛋白酶K(10-15μl)。消化完全后離心(12000 r/min，10min)，將上清轉(zhuǎn)移至另一微量離心管中。

(3)DNA提取：

①加入等體積的苯酚/氯仿(1：1)抽提2次，離心(12 000r/min，10 min)；

②轉(zhuǎn)移上清，加入等體積苯酚/氯仿/異戊醇(25：24：1)抽提1次，離心(12 000 r/min，10 min)，轉(zhuǎn)移上清；

③加入上清液1/10體積的3 M冰凍NaAC溶液和2倍體積冷乙醇沉淀DNA，于-4℃冰箱沉淀過(guò)夜；

④次日于4℃離心(12 000 r/rain，10 rain)，收集DNA沉淀。將沉淀溶于20μl TE緩沖液，加1μl RNA酶，放置于-4℃冰箱保存待用。

方法五：Gpelz氏DNA提取方法

1．   切除多余石蠟，暴露組織

2．   將組織切碎（最大徑<0.5mm），稱重；

3．   溶于TE9提取液（組織<50mg/5ml,50～500mg/10ml）,高速混懸2～3min；于48℃放置24h

4．   再次混懸組織，加入蛋白酶K至終濃度1mg/ml,SDS至2%，孵育40h；

5．   用等體積酚-氯仿溶液抽提3次

6．   2.5倍體積乙醇沉淀DNA

7．   -70℃放置2～4h

8．   9000×g離心1h

9．   沉淀物用70%乙醇洗1次

10．干燥，TE（pH7.2）溶解。

方法六：

1、取蠟塊切片 15-20 張（8μm），置于eppendorf 管中，加入 1ml 的二甲苯，37℃作用 3h，以 10000rpm，離心 3min，傾去二甲苯。重復(fù) 3-4 次，觀察管壁是否光滑。如果仍有蠟質(zhì)殘存，需繼續(xù)脫蠟。

2、剃度酒精水化：加入 100%乙醇 1ml，室溫下放置 30min，以 10000rpm離心 3min，去上清；再依次分別加入 95%；75%；50%的乙醇重復(fù)上面的步驟。

3、消化：以 1 SSC500μL 加入 SSC 洗滌沉淀，以 12000rpm 離心 3min。棄去上清夜，干燥沉淀。加入石蠟消化液 400μL，PK（20mg/ml）20μl；55℃消化 120h，第四天，補(bǔ)加 PK10μl。

4、消化后的液體很清亮，肉眼可見(jiàn)的組織較少。將其轉(zhuǎn)入 98℃的水浴箱中，煮沸 10min，以滅活 PK，取出后置于冰上，使其迅速冷卻。以 10000rpm，離心 5min。

5、取上清加等量的酚-氯仿，輕顛倒混勻呈乳白色。低溫下以 14000rpm，離心 10min。小心取上清，再加入等量的酚-氯仿重復(fù)上面的步驟。

6、取上清加入預(yù)冷的兩倍體積的無(wú)水乙醇及 1/10 的乙酸鈉（PH5.2），顛倒混勻。置于-20℃，30min。低溫下以 14000rpm，離心 10min，去上清。

7、沉淀用 1ml 的 70%乙醇洗滌 2 次，顛倒 eppendorf 管數(shù)次）14000rpm，（以離心 5min，，自然干燥沉淀。

8、加 TE20μl，（含 RNA 酶），4℃下過(guò)夜。