一、實驗目的:
比較simgen病毒核酸純化試劑盒和傳統煮沸法提取核酸的效果
二、實驗方法:
1.采用Simgen病毒核酸純化試劑盒提取HBV DNA(詳見產品說明書);
2.采用傳統煮沸法提取HBV DNA
3.將所獲核酸進行擴增
三、實驗樣本:
血清
四、實驗結果:
將所得的DNA作為模板擴增,得:
曲線1:傳統煮沸法提取的血清中HBV DNA作為模板的擴增曲線(50 μl擴增體系中加入5 μl分離的DNA)。
曲線2:Simgen病毒核酸純化試劑盒分離純化的同一血清(200 μl)中HBV DNA作為模板的擴增曲線(50 μl擴增體系中加入5 μl純化的DNA)。
曲線3:提高Simgen病毒核酸純化試劑盒分離純化的HBV DNA作為模板的使用量的擴增曲線(50 μl擴增體系中加入25 μl純化的DNA)。
五、實驗結論:
1.根據曲線1和曲線2分析,Simgen病毒核酸純化試劑盒所提取的HBV DNA的濃度較傳統煮沸法更高,因此檢測靈敏度也更高。
2.根據曲線2和曲線3分析,增加HBV DNA模板使用量,CT值減小,未見明顯的抑制效果,說明采用Simgen病毒核酸純化試劑盒提取的HBV DNA純度較高,不含雜質和抑制物。