一、材料：

1. 樣品：送檢尾部組織樣本由客戶提供。

2. 動物組織DNA試劑盒（Simgen，Cat.No.3101050）

3. PCR擴增試劑、引物、探針為杭州新景生物試劑開發有限公司自配或委托上海生工生物技術有限公司合成。

4. PCR儀：ABI PRISM® 7500 Sequence DeteCtion System

5. 離心機：Thermo Biofuge pico

二、方法：

1. 用Simgen動物組織DNA試劑盒分離純化樣本中的DNA。

2. 按下列組分配制PCR檢測試劑( 40 μl反應體系)：

Master Mix(2×)              20.0 μl

上游引物FP                1.0 μl

下游引物RP                1.0 μl

探針Probe                  0.5 μl

50× ROX                   0.8μl

ddH₂O                     11.7 μl

向每個PCR反應管中加入35 μl反應混合液，再加入5μl分離純化的DNA進行qPCR檢測。

注：陽性對照用實驗室保藏的小鼠肌肉DNA作為模板，陰性對照用ddH₂O作為模板。

3. PCR循環條件設置： 95℃ 1 min→40×（95℃ 15s→60℃ 30s）

三、結果判定：

1．有效性原則

陰性對照：無FAM熒光信號檢出，未出現典型的擴增曲線。

陽性對照：有FAM熒光信號檢出，并出現典型的擴增曲線。

以上要求必須同時滿足，否則本次檢測無效。

結果：

1. 送檢樣本中的尾部組織DNA通過鼠的特異性熒光探針擴增檢測呈陽性，判斷樣本的物種為鼠。

2. 結果分析：

1） 本次尾部組織樣本提取了兩管DNA，編號為Sample 1和Sample 2，經PCR擴增均為陽性，Ct值分別為16.105和16.524，陽性對照的Ct值分別為16.358和16.596，陰性對照未起線。

2） 從樣本DNA電泳發現，樣本的DNA保存較為完整，應該是尾部組織水分少，腐敗情況不嚴重。

 送檢動物尾部組織樣本的Ct值報告：

送檢動物尾部組織樣本的熒光定量PCR擴增曲線：

送檢動物尾部組織樣本DNA電泳圖：

如圖所示，其中M為DL2000Marker, 泳道1、2為送檢樣本DNA，泳道3、4是實驗室保藏的小鼠肌肉組織DNA。